高效液相色谱仪的使用和原理分析

您好,蔡蔡就为大家解答关于高效液相色谱仪的使用和原理分析相信很多小伙伴还不知道,现在让我们一起来看看吧！

1、高效液相色谱法(HPLC)是目前应用广泛的分离、分析、纯化有机化合物(包括能通过化学反应转变为有机化合物的无机物)的有效方法之一。

2、 在已知的有机化合物中，约有80%能用高效液相色谱法分离、分析，而且由于此法条件温和，不破坏样品，因此特别适合高沸点、难气化挥发、热稳定性差的有机化合物和生命物质。

3、HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。

4、其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部位。

5、有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、与柱或保护住、柱温控制器等，现代HPLC仪还有微机控制系统，进行自动化仪器控制和数据处理。

6、制备型HPLC仪还备有自动馏分收集装置。

7、目前常见的HPLC仪生产厂家国外有Waters 公司、Agilent 公司(原HP公司)、岛津公司等，国内有上海伍丰科学仪器有限公司，上海禾工科学仪器有限公司，大连依利特公司、北京创新通恒、北京温分等。

8、一、输液泵1.泵的构造和性能输液泵是HPLC系统中最重要的部件之一。

9、泵的性能好坏直接影响到整个质量和分析结果的可靠性。

10、输液泵应具备如下性能:①流量稳定，其RSD应小于0.5%，这关系到定性定量的准确性;②流量范围宽，分析型应在0.1~10ml/min范围内连续调，制备型应能达到100ml/min;③输出压力高，一般应能达到150~300KG/CM2:④液缸容积小;⑤密封性能好，耐腐蚀。

11、泵的种类很多，按输液性质可分为恒压泵和恒流泵。

12、恒流泵按结构又可分为螺旋注射泵、柱塞往复泵和隔往复泵。

13、恒压泵受柱阴影响，流量不稳定;螺旋泵缸体太大，这两种泵己被淘汰目前应用最多的是柱塞往复泵。

14、柱塞往复泵的液缸容积小，可至0.1ml，因此易于清洗和更换流动相，特别适合于再循环和梯度洗脱;改变电机转速能方便地调节流量，流量不受柱压影响;泵压可达400KG/CM2。

15、ADW主要缺点是输出的脉冲性较大，现多彩采用双泵系统来克服。

16、双泵按连接方式可分为并联式和串联式，一般说来并联泵的流量重现性较好(RSD为0.1%左右，串联泵为0.2~0.3%)，但出现故障的机会较多(因多了单向阀)，价格也较贵。

17、二、进样器一般HPLC分析常用六通进样阀(以美国RHEODYNE公司的7725和7725I型最常见)，其关键部件由圆形密封垫子(转子)和固定底座(定子)组成。

18、耐高压(35~40MPA)，进样量准确，重复性好(0.5%)，操作方便。

19、六通阀进样方式有部分装液法和完全装液法两种。

20、①用部分装液法进样时，进样量应不大于定量环体积的50%(最多75%)，并要求每次进样体积准确、相同。

21、此法进样的准确度和重复性决定于注器取样的熟练程度，而且易产生由进样引起的峰展宽。

22、②用完全装液法进样时，进样量应不小于定量环体积的5~10倍9最少3倍，这样才能完全置换定量环内和流动相，消除管壁效应，确保进样的准确度及重复性。

23、三、色谱柱色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。

24、对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。

25、市售的用于HPLC的各种微粒填料好多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等，其粒度一般为3，5，7，10UM等，柱效理论值可达5~16万/米。

26、对于一般的分析只需5000塔板数的柱效;对于同系物分析，只要500即可;对于较难的分离物质对则可采用高达2万的柱子，因此一般10~30CM左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。

27、柱效受柱内外因素影响，为使色谱柱达到最佳效率，除柱外死体积要小外，不要有合理的柱结构(尽可能减少填充床以外的死体积)及装填技术。

28、即使最好的装填技术，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的，靠近管壁的部位比较疏松，易产生沟流，流速较快，影响冲洗剂的流形，使谱带加宽，这就是管壁效应。

29、这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍料径的厚度。

30、在一般的液相色谱系统中，柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。

31、四、检测器HPLC的检测器分为两类:通用型检测器和专用型检测器。

32、1.通用型检测器可连续测量色谱柱的流出物的全部特性变化，通常采用差分测量法，这类检测器包括示差折光检测器、介电常数检测器、电导检测器等，通用检测器适用范围广，但由于对流动相有响应，因此易受温度变化、流动相和组分的变化的影响，噪声和漂移都比较大，灵敏度较低，不能用梯度洗脱。

33、2.专用型检测器用以测量被分离样品组分某种特性的变化。

34、这类检测器对样品中组分的某种物理或化学性质敏感，而这一性质是流动相所不具备的，或至少在操作条件下不显示。

35、这类检测器包括紫外检测器、荧光检测器、放射性检测器等。

本文就讲到这里，希望大家会喜欢。

标签：

版权声明：本文由用户上传，如有侵权请联系删除！