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诱变育种的基本步骤和方法(诱变育种的基本步骤)
发布时间:2022-09-04 01:23:15司马滢祥来源:
导读您好,蔡蔡就为大家解答关于诱变育种的基本步骤和方法,诱变育种的基本步骤相信很多小伙伴还不知道,现在让我们一起来看看吧!1、基本原理:...
您好,蔡蔡就为大家解答关于诱变育种的基本步骤和方法,诱变育种的基本步骤相信很多小伙伴还不知道,现在让我们一起来看看吧!
1、基本原理:紫外线诱变处理的有效波长为200~300×10nm,最适为254nm(此为核酸的吸收高峰)。
2、dna和rna的嘌呤和嘧啶吸收紫外光后,dna分子形成嘧啶二聚体,即两个相邻的嘧啶共价连接,二聚体出现会减弱双键间氢键的作用,并引起双链结构扭曲变形,阻碍碱基间的正常配对,从而有可能引起突变或死亡。
3、另外二聚体的形成,会妨碍双链的解开,因而影响dna的复制和转录。
4、总之紫外辐射可以引起碱基转换、颠换、移码突变或缺失,即是所谓的诱变。
5、主要步骤:1.将细菌培养液以3000r/min离心5min,倾去上清液,将菌体打散加入无菌生理盐水再离心洗涤。
6、2.将菌悬液放入一已灭菌的,装有玻璃珠的三角瓶内用手摇动,以打散菌体。
7、将菌液倒入有定性滤纸的漏斗内过滤,单细胞滤液装入试管内,一般处于浑浊态的细胞液含细胞数达108个/ml左右,作为待处理菌悬液。
8、3.取2~4mL制备的菌液加到直径9cm培养皿内,放入一无菌磁力搅拌子,然后置磁力拌器上、15W紫外线下30cm处。
9、在正式照射前,应先开紫外线10min,让紫外灯预热,然后开启皿盖正式在搅拌下照射10~50s。
10、操作均应在红灯下进行,或用黑纸包住,避免白炽光。
11、4.取未照射的制备菌液和照射菌液各0.5ml进行稀释分离,计数活菌细胞数。
12、5.取照射菌液2ml于液体培养基中(300ml三角瓶内装30ml培养液),120r/min振荡培养4~6h。
13、6.取中间培养液稀释分离、培养。
本文就讲到这里,希望大家会喜欢。
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