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检测蛋白质的方法有哪些(检测蛋白质的方法介绍)
发布时间:2022-07-10 18:05:40许娜信来源:
大家好,小牛来为大家解答以上问题。检测蛋白质的方法有哪些,检测蛋白质的方法介绍很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!
解答:
1、凯氏定氮法
2、凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮含量的方法。即在催化剂的存在下,样品中的有机氮用浓硫酸消化转化为无机铵盐,然后铵盐在碱性条件下转化为氨,用水蒸气蒸馏出来,用过量的硼酸溶液吸收,再用标准盐酸滴定,计算出样品中的氮含量。
3、因为蛋白质中的氮含量是相对恒定的,所以可以从其氮含量计算出蛋白质的含量,所以这种方法是一种经典的蛋白质定量方法。
4、缩二脲法
5、缩二脲法是一种用于鉴定蛋白质的分析方法。缩二脲试剂是一种碱性含铜试液,呈蓝色,由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制而成。
6、当底物含有肽键(多肽)时,试液中的铜与多肽配位,络合物呈紫色。浓度可通过比色法分析,紫外-可见光谱中的波长为540nm。识别反应的灵敏度为5-160毫克/毫升。反应蛋白单位为1-10毫克。
7、苯酚试剂法
8、取6支试管,分别贴上标签。前五个试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液。最后一个试管加入待测蛋白溶液,没有标准蛋白溶液。在室温下放置30分钟。以第一个不含蛋白溶液的试管为空白对照,在650nm波长处测量每个试管中溶液的吸光度。
9、紫外线吸收法
10、大多数蛋白质在280nm波长处具有特征性的最大吸收,这是由于蛋白质中存在酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸。可用于测定0.1 ~ 0.5 mg/ml蛋白质溶液的含量。
11、取9支试管,分别贴上标签。前8个试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液,第一个试管不加入标准蛋白溶液,最后一个试管加入待测蛋白溶液,不加入标准蛋白溶液。每个试管中的液体总量是通过加入蒸馏水来弥补而保持一致的。将液体混合均匀,在280nm波长下进行比色分析,记录吸光度值。
12、科斯亮蓝法
13、考马斯亮蓝显色法的基本原理是蛋白质能与考马斯亮蓝G-250定量结合。考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后,其可见光最大吸收峰从465nm变为595nm。
14、当考马斯亮蓝G-250的浓度过量且恒定时,当溶液中蛋白质的浓度不同时,不同量的考马斯亮蓝G-250会从465nm的吸收峰形式变为595nm的吸收峰形式,这种变化有一定的定量关系。
15、一般来说,当溶液中蛋白质的浓度增加时,显色溶液在595nm处的吸光度基本上可以线性增加。因此,考马斯亮蓝G-250显色法可用于测定溶液中蛋白质的含量。
本文到此结束,希望对大家有所帮助。
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